真菌總RNA提取試劑盒 (帶gDNA過濾器)
適用于快速提取各種真菌的總RNA,gDNA過濾器能高效濾除gDNA,提取的RNA,可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普通轉錄組測序、芯片等。真菌總RNA提取試劑盒 (帶gDNA過濾器)
Fungus Total RNA Mini Kit
真菌總 RNA 提取試劑盒(含 gDNA 過濾器)
真菌總RNA提取試劑盒 (帶gDNA過濾器)
目錄號:91515
產品內容
產品組份 | 91515-50(50 次) |
裂解液 PRL | 50 ml |
糖酚去除劑 PAD | 5 ml |
裂解液 PRL Plus | 25 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml(需加入指ding量無水乙醇) |
RNase-Free H2O | 5 ml |
gDNA 過濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇
保存條件
室溫(15~25℃)下,存放 12 個月,不影響使用效果。
產品簡介
適用于快速提取各種真菌的總RNA,gDNA過濾器能高效濾除gDNA,提取的RNA,可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普通轉錄組測序、芯片等。
產品特點
1. 無毒:免lv仿、免 β-巰基乙chun!
2. 高效:提取全過程僅需 20 min!
3. 高質:28s/18s=2:1,OD260/280=2.0~2.2!
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
操作步驟
提示:
所有離心步驟均需要在室溫(15~37℃)下進行。
第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙醇,詳見瓶身的標簽。
1. 材料處理:
a.轉移 500 μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖酚去除劑 PAD 至 1.5 ml 離心管中,混勻備用。
注意:糖酚去除劑 PAD 是提取多糖、多酚、次級代謝產物多、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分。對于簡單樣本,不加糖酚去除劑PAD,RNA 產量可能會提高一些。
b.液氮中研磨真菌組織成細粉,取≤50 mg 細粉轉入上述裝有 PRL 裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩 30 sec,充分混勻。放離心管架上,接著研磨下一個樣本。
(冬天氣溫低, 37℃搖床放置 3 min,可增強裂解效果,提高產量)
c. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min,沉淀不能裂解的碎片。
注意:使用1 ml裂解液PRL和100μl糖酚去除劑PAD去裂解 100 mg 樣品,RNA 產量會翻倍。
2. 小心吸取上清(一般 480 μl,注意不要吸到沉淀)轉入一個新的 1.5 ml離心管中,加入 0.5 倍體積(一般 240 μl)的無水乙醇, 吹打混勻。
3. 每次轉移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中(過濾器放入收集管), 13,000 rpm 離心 2 min,倒棄濾液。此時,絕大部分的 gDNA 被濾除,RNA 和少量 gDNA 殘留被吸附在膜上。重復此過程,直到溶液全部轉入 gDNA 過濾器。
4. 取出步驟 3 的 gDNA 過濾器,放入一個新的 2.0ml 離心管中,加入 500μl裂解液 PRL Plus,13,000 rpm 離心 1 min,收集濾液(RNA 在濾液中),加入 250 μl 無水乙醇,吹打混勻。
5. 將濾液混合物轉入 RNA 吸附柱中,13,000 rpm 離心 2 min,此時,RNA被吸附在膜上,倒棄濾液。
6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1,室溫放置 1 min,13,000 rpm 離心 30 sec,倒棄濾液。
7. 加入 500 μl 漂洗液 RW(檢查是否已加乙醇),13,000 rpm 離心 30 sec,倒棄濾液。
8. 重復步驟 7。
9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中,13,000 rpm 離心 2 min,除去膜上殘留的乙醇。
10. 取出 RNA 吸附柱,放入 1.5 ml RNase-free 離心管中,向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O,室溫放置 1 min,13,000 rpm 離心 1 min。
11.提取的總 RNA,可直接用于下游實驗,或于-70℃保存,以免降解。
相關產品:
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit(for PCR or qPCR)
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase(for qPCR)
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀)
真菌總RNA提取試劑盒 (帶gDNA過濾器)